พลังงานเป็นสิ่งจำเป็นเมื่อเริ่มต้นไกลโคไลซิสเพื่อแยกโมเลกุลกลูโคสออกเป็นสองโมเลกุลไพรูเวต ซึ่งจะเข้าสู่ขั้นตอนที่ II ของการหายใจระดับเซลล์ พลังงานที่จำเป็นในการแยกกลูโคสนั้นมาจาก ATP สองโมเลกุล นี่เรียกว่าระยะการลงทุนด้านพลังงาน เมื่อไกลโคไลซิสดำเนินไป พลังงานจะถูกปลดปล่อยออกมา และพลังงานจะถูกใช้เพื่อสร้าง ATP สี่โมเลกุล นี่คือขั้นตอนการเก็บเกี่ยวพลังงาน ไซโตพลาสซึม เป็นผลให้มีการเพิ่มขึ้นสุทธิของโมเลกุล ATP สองโมเลกุลระหว่างไกลโคไลซิส ในระหว่างขั้นตอนนี้ อิเล็กตรอนพลังงานสูงจะถูกถ่ายโอนไปยังโมเลกุลของ NAD เพื่อผลิต NADH สองโมเลกุล ซึ่งเป็นอีกโมเลกุลหนึ่งที่มีพลังงาน NADH ใช้ในขั้นตอน III ของการหายใจระดับเซลล์เพื่อสร้าง ATP มากขึ้น